Оглавление
- . Введение. Значение культурального исследования
- Специализированные питательные среды для криптококков
Практический алгоритм культуральной диагностики криптококков
2.1.Bird Seed Agar (GACA, агар Штайба)
2.2. CGB-агар (canavanine-glycine-bromthymol blue agar)
- 2.3.Дополнительные среды. CDBT-агар (creatinine dextrose bromthymol blue thymine)
- Практический алгоритм культуральной диагностики криптококков
Культуральное исследование является ключевым этапом лабораторной диагностики криптококков, позволяющим не только подтвердить наличие возбудителя, но и перейти к его дальнейшей идентификации. Криптококки относятся к относительно неприхотливым грибам и, как правило, хорошо растут на стандартных питательных средах, включая агар Сабуро, без необходимости создания специальных условий культивирования. В процессе роста формируются типичные для дрожжевых грибов колонии, которые, как правило, характеризуются следующими признаками:
- гладкая поверхность
- блестящий внешний вид
- дрожжеподобная консистенция
В то же время именно эта относительная «универсальность» роста создаёт диагностическую проблему. По морфологии колоний криптококки не имеют строго специфических признаков и могут быть легко перепутаны как с грибами рода Candida, так и с другими, потенциально патогенными или сапрофитными представителями рода Cryptococcus.
Специализированные питательные среды для криптококков
- Как уже отмечалось, рост криптококков на стандартных средах (например, агар Сабуро) не позволяет достоверно отличить их от других дрожжевых грибов. Поэтому ключевое значение в лабораторной диагностике приобретает использование селективных и дифференциальных сред для криптококков.
2.1. Bird Seed Agar (GACA, агар Штайба) Одной из наиболее информативных сред является:
- Bird Seed Agar (агар с семенами нигера)
- также известен как GACA (Guizotia abyssinica creatinine agar)
- или агар Штайба (Staib agar)
Принцип метода основан на способности Cryptococcus neoformans синтезировать пигменты за счёт активности фенолоксидаз.
При росте на данной среде формируются:тёмно-коричневые (до почти чёрных) колонии Этот признак является важным диагностическим ориентиром и позволяет заподозрить криптококки уже на этапе культурального исследования.
Практическое значение среды:
- быстрый скрининг криптококков
- дифференциация от большинства других дрожжевых грибов
- повышение специфичности диагностики
👉 Важно: не все виды рода Cryptococcus дают типичную пигментацию, что требует дальнейшего подтверждения
2.2. CGB-агар (canavanine-glycine-bromthymol blue agar)
Для дифференциации патогенных видов криптококков используется: CGB-агар Данная среда позволяет различать Cryptococcus neoformans и Cryptococcus gattii. Принцип:
- C. gattii изменяет цвет среды на синий
- C. neoformans не вызывает изменения окраски
Таким образом, CGB-агар является простым и наглядным инструментом видовой дифференциации криптококков в лаборатории
2.3. Дополнительные среды
В ряде случаев могут использоваться и другие специализированные среды, например:
- CDBT-агар (creatinine dextrose bromthymol blue thymine)
Однако в практической работе наибольшее значение имеют именно Bird Seed Agar и CGB-агар как наиболее информативные и доступные методы дифференциации.
Практический алгоритм культуральной диагностики криптококков
На практике ключевым является не наличие отдельных тестов, а правильная последовательность их применения. Ниже приведён рабочий алгоритм, который может использоваться в рутинной лаборатории.
Этап 1. Первичный посев Материал (ликвор, кровь, БАЛ и др.) засевают на:
- агар Сабуро с хлорамфениколом
- (при возможности сразу) Bird Seed Agar
Цель: получение роста, первичная оценка морфологии
Этап 2. Изучение свойств колоний При появлении роста обращают внимание на:
- дрожжеподобный характер колоний
- гладкую и блестящую поверхность
👉 На этом этапе идентификация невозможна, только подозрение.
Этап 3. Проверка на криптококки При подозрении на дрожжевые грибы:
- выполняют микроскопию культуры
- проводят окраску Indian ink
- Цель: выявление капсулы
- подтверждение принадлежности к криптококкам – круглые почкующиеся клетки с узкими перешейками.
Этап 4. Использование дифференциальных сред Далее подключаются специализированные среды:
- Bird Seed Agar → пигментация (скрининг криптококков)
- CGB-агар → дифференциация C. neoformans / C. gattii